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免疫組化問題原因及相關(guān)解決方法

時(shí)間:2019/12/26閱讀:937
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  時(shí)間沒有等我,是你忘了帶我走 ,我左手過目不忘的的螢火,右手里是十年一個(gè)漫長的打坐。轉(zhuǎn)眼2019年已經(jīng)接近尾聲了,關(guān)于免疫組化問題,上海古朵生物一一為您解答
 
  1、染色過強(qiáng)
 
  原因及相關(guān)解決方法
 
  a 抗體濃度過高或孵育時(shí)間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間:室溫1小時(shí)或4度過夜
 
  b 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度
 
  c DAB顯色時(shí)間過長或濃度過高 顯色時(shí)間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
 
  2、非特異性背景染色
 
  原因及相關(guān)解決方法
 
  a 操作過程中沖洗不充分: 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
 
  b 組織中含過氧化物酶未阻斷 :可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長
 
  c 組織中含內(nèi)原性*:正常非免疫動物血清再封閉
 
  d 血清蛋白封閉不充分:延長血清蛋白封閉時(shí)間
 
  3、染色弱
 
  原因及相關(guān)解決方法
 
  a 抗體濃度過低、孵育時(shí)間過短:提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘
 
  b 試劑超過有效使用時(shí)間: 應(yīng)更換試劑
 
  c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 :每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
 
  使試劑稀釋 (應(yīng)防止切片干燥)
 
  d 室溫太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過夜
 
  e 蛋白封閉過度:封閉不要超過12分鐘
 
  4、染色陰性
 
  原因及相關(guān)解決方法
 
  a 操作步驟錯(cuò)誤:應(yīng)重試設(shè)陽性對照
 
  b 組織中無抗原:設(shè)陽性對照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
 
  c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤:仔細(xì)確定一抗二抗種屬無誤
 
  上海古朵生物是一家專業(yè)從事“產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)、市場銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的高科技生物技術(shù)公司,公司生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量有保證,含量高,能夠給實(shí)驗(yàn)帶來準(zhǔn)確的結(jié)果。如有需要可咨詢我司銷售人員,我們將竭誠為您服務(wù)。

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