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解析純化蛋白與人血清蛋白分子量不太之處

時(shí)間:2019/12/30閱讀:371
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  蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)中起重要作用的生物大分子,與一切揭開生命奧秘的重大研究課題都有密切的關(guān)系。蛋白質(zhì)是人類和其他動(dòng)物的主要食物成分,高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要標(biāo)志之一。以下針對純化蛋白與人血清蛋白分子量不一樣作分析:
 
  客戶問:
 
  用大腸桿菌表達(dá)純化的蛋白,和人血清中這種蛋白的分子量不同,western顯示血清中這種蛋白的分子量高于純化的蛋白,請問如何解釋呢?
 
  技術(shù)答:
 
  1  可能人血清中的蛋白是被修飾了的,如糖基化以及其他可以影響分子量的修飾。不知道血清中的分子量比你純化的大多少KD?
 
  2  檢查一下蛋白序列中有沒有糖基化位點(diǎn)。大腸桿菌不能糖基化。
 
  3  不知道如何確定是否用糖基化位點(diǎn)呢?血清中分子量比純化的高個(gè)2~3kd吧,這是糖基化么?
 
  4  N即Asparagine Asp
 
  X即任意氨基酸
 
  T即Threonine Thr
 
  S即Serine Ser
 
  NXT NXS即在氨基酸一級結(jié)構(gòu)中有Asp-X-Thr或Asp-X-Ser序列則會(huì)被糖基化。
 
  查文獻(xiàn)我建議可查其蛋白質(zhì)性質(zhì)研究方面的文獻(xiàn),或以蛋白+糖基化作關(guān)鍵詞嘗試查詢。你關(guān)注生物活性時(shí)可不能忽略糖基化這一點(diǎn)哦,往往糖基化是很多蛋白折疊和實(shí)現(xiàn)活性的重要因素。
 
  5  糖基化分三種,N糖基化有特殊識(shí)別序列N-X-S/T,O糖基化發(fā)生位點(diǎn)迄今尚無明確規(guī)律,糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細(xì)胞膜上,可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成,表現(xiàn)出微觀不均一性,因此其分子量是有一定變化。
 
  一般可預(yù)測N糖基化位點(diǎn),如果存在N-X-S或N-X-T序列,則基本上都是要被糖基化的。能查找一下相關(guān)文獻(xiàn),如果你做的蛋白是已知的,一般都會(huì)有文獻(xiàn)報(bào)道糖基化分三種,N糖基化有特殊識(shí)別序列N-X-S/T,O糖基化發(fā)生位點(diǎn)迄今尚無明確規(guī)律,糖基磷脂酰肌醇錨定一般是定位在細(xì)胞膜上,可能血清中的蛋白是沒有的。由于糖基化不是由模板合成,表現(xiàn)出微觀不均一性,因此其分子量是有一定變化。
 
  一般可預(yù)測N糖基化位點(diǎn),如果存在N-X-S或N-X-T序列,則基本上都是要被糖基化的。能查找一下相關(guān)文獻(xiàn),如果你做的蛋白是已知的,一般都會(huì)有文獻(xiàn)報(bào)道。。
 
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