儲(chǔ)存事項(xiàng):

1.        第1次使用時(shí)，將試劑盒所帶的全部RNase A加入溶液YP1（終濃度100µg/ml）置于4℃保存。如果溶液YP1中RNase A失活，提取的質(zhì)?？赡軙?huì)有微量RNA殘留，在溶液YP1中補(bǔ)加RNase A即可。

2.        環(huán)境溫度低時(shí)溶液YP2中SDS可能會(huì)析出渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要?jiǎng)×覔u晃，以免形成過量的泡沫。

3.     Lytic Enzyme為蝸牛酶甘油儲(chǔ)液，因此比較粘稠，請(qǐng)小心取用，－20℃保存。 蝸牛酶是從蝸牛的嗦囊和消化道中制備的混合酶，它含有纖維素酶，果膠酶，*，蛋白酶等20多種酶。適合破碎溶解各種酵母的細(xì)胞壁。

4.          避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

v  產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用改進(jìn)SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞并結(jié)合lytic Enzyme特異消化酵母細(xì)胞壁，能在1小時(shí)內(nèi)從酵母培養(yǎng)液中分離出高純度質(zhì)粒DNA。酵母收集后，加入破壁酶去除細(xì)胞壁后，然后堿裂法裂解細(xì)胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低PH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除， 后低鹽、高PH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

v  關(guān)于平衡液的使用

1.          介紹：核酸吸附硅膠膜柱子*放置過程中會(huì)同空氣中的電荷/塵埃發(fā)生反應(yīng)而影響其核酸的結(jié)合能力。硅膠柱經(jīng)平衡液預(yù)處理后可大大減少柱子中硅膠膜的憎水基團(tuán)，提高核酸的結(jié)合能力。從而提高硅膠柱子回收效率或者產(chǎn)量。平衡液是強(qiáng)堿性溶液，若不小心碰到，請(qǐng)用大量自來(lái)水清洗。用完后需蓋緊瓶蓋，以免接觸空氣。室溫保存。在保存過程中可能有沉淀生成，請(qǐng)加熱至37℃使沉淀*消失。

2.          使用方法：取一個(gè)新的硅膠膜吸附柱子裝在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液，將吸附柱子重新放回收集管。此時(shí)平衡液預(yù)處理柱子完畢。接后續(xù)的操作步驟。

v  注意事項(xiàng)

1.          所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2.          溶液YP3和去蛋白液PE中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

3.          通常酵母質(zhì)粒拷貝數(shù)都很低，一般通過電泳或者分光光度計(jì)都很難檢測(cè)到。提取的質(zhì)粒如果用于下游試驗(yàn)時(shí)通常建議使用量為： 1-5μl用做PCR 模板;5-10μl 用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌,選擇商業(yè)化的率的感受態(tài)細(xì)胞。

4.          用戶需要自備Sorbitol buffer( 1M *， 0.1M Na₂EDTA，28 mMβ-巰基乙醇)。配制方法：在600 ml 去離子水里面溶解 182.2克*，加入200 ml 0.5 M Na₂EDTA (pH 8.0) ，不需要調(diào)節(jié)PH值，定容到1L，4℃保存。臨用前加0.2%β-巰基乙醇(商品化的β-巰基乙醇摩爾濃度一般為14M)。

5.          菌體濃度檢測(cè)一般OD₆₀₀值為1的時(shí)候,釀酒酵母細(xì)胞是1-2x10⁷ cells/ml，由于菌種和分光度計(jì)不同即使同樣細(xì)胞數(shù)量OD值變化也很大，以上僅供參考。

6.          洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒應(yīng)該保存在－20℃。質(zhì)粒DNA如果需要*保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

v  操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）