【中文名稱(chēng)】：大鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒Kit價(jià)格說(shuō)明書(shū)
 

　　【英文名稱(chēng)】：Ratisletcellantibody,ICAELISAKit
 

　　【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T。
 

　　【保存條件】：2-8℃低溫保存
 

　　【保質(zhì)期】：6個(gè)月，所有試劑盒均提供批次
 

　　試劑盒組成：
 

　　封板膜:2片(48)/2片(96)
 

　　說(shuō)明書(shū):1份
 

　　密封袋:1個(gè)
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　酶標(biāo)包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存
 

　　樣品稀釋液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　終止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
 

樣本處理及要求：
 

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
 

　　2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
 

　　3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
 

　　4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
 

　　5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
 

　　6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
 

　　7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　操作注意事項(xiàng)：
 

　　1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
 

　　2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
 

　　3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
 

　　4)使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
 

　　5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
 

　　6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
 

　　7)底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
 

　　8)加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
 

　　9)按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
 

　　操作步驟：
 

　　1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
 

　　2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
 

　　3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水；
 

　　4. 在樣品孔中加入10μl的*；(不含空白對(duì)照孔,切忌：*只加樣品孔！)
 

　　5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對(duì)照孔)
 

　　6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
 

　　7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
 

　　8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
 

　　9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對(duì)照孔)
 

　　10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
 

　　11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；