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ELISA試劑盒檢測技術服務標準

來源: 北京冬歌生物科技有限公司    2014年12月05日 10:13  
一、服務內容

凡購買本司任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,您只需將需要檢測的動物(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Pig,Monkey……)種類和檢測指標(介素類、因子類)及標本數(shù)量(48T/96T)告知我司業(yè)務人(張)員即可。在接到客戶標本當日起,兩周內將檢測報告交到客戶手中。

二、質量保證

北京冬歌生物科技有限公司提供的檢測用所有試劑,適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本,靈敏度*,多年專業(yè)酶免服務,我們保證對所售任何產(chǎn)品一概負責到底,每一份實驗結果都真實可靠。

三、注意事項

在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術人員溝通。

四、液體類標本

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1、血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

2、血漿:

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

3、尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4、細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5、組織標本:

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

五、ELISA方法簡介

1、 包被抗原:稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液,多肽濃度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC,洗凈

2、 1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉,0.1ml/孔,37oC1h,洗凈

3、 稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔,37oC 30分鐘,洗凈

4、 稀釋辣根過氧化物每標記的二抗 0.1ml/孔,37oC 40分鐘,洗凈

5、 顯色:TMB顯色

A液:四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍

B液:5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml

終止液:2N硫酸

A液、B液各一滴,比光顯色10分鐘,終止液一滴

6、 450nm 波長 測OD值

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