1.單層貼壁細胞總蛋白的提取
(1)倒掉培養(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液(或?qū)⑵恐绷⒎胖靡粫菏箽堄嗯囵B(yǎng)液流到瓶底然后再用移液器將其吸走)。
(2)每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH7.2～7.3)。在恒溫搖床平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上。
(3)按1ml裂解液加10 μl PMSF(100 mM)，搖勻置于冰上。(PMSF要搖勻至無結(jié)晶時才可與裂解液混合。)
(4)每瓶細胞加400 μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30 min，為使細胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來回搖動。
(5)裂解完后，用干凈的刮棒將細胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)(動作要快)，然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5 ml離心管中。(整個操作盡量在冰上進行。)
(6)于4℃下12000 rpm離心5 min。(提前開離心機預冷)
(7)將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移倒0.5 ml的離心管中放于-20℃保存。
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