国产睡熟迷奷系列网站,欧美激情一级精品国产,欧美高清在线观看一区二区,欧美黄片一区二区视频

科德角國(guó)際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司
三星會(huì)員 | 第2年

18701356057

鱟血變形細(xì)胞裂解物的制備

時(shí)間:2023/10/13閱讀:120
分享:
我們了解到,鱟血液中含有一種細(xì)胞即變形細(xì)胞,這種細(xì)胞內(nèi)的溶解物(裂解物tachypleus lysate,TL)可與微量細(xì)菌內(nèi)毒素起凝集反應(yīng),這是由TL中的一種酶被細(xì)菌(革蘭陰性菌)細(xì)胞壁成分——脂多糖激活,使其蛋白質(zhì)形成凝膠所致。為此人們已闡明了這方面的理論機(jī)制,并已著手利用各種技術(shù)從自然界存在的某些物質(zhì)中把它提取出來(lái),實(shí)踐并應(yīng)用于社會(huì),鱟變形細(xì)胞內(nèi)的溶解物主要有兩種,凝固蛋白原及凝固蛋白酶原。這兩種物質(zhì)提取后,即為檢測(cè)內(nèi)毒素的益試劑,它的檢測(cè)靈敏度高低取決于制備擻血細(xì)胞溶解物的質(zhì)量。因此,在制備提取過(guò)程中不能有微量的內(nèi)毒素進(jìn)入,所以,鱟試劑的制備提取過(guò)程是有相當(dāng)難度的。

一、材料與制備
1、鱟

采用我國(guó)東南沿海地區(qū)的鱟即東方鱟(中國(guó)鱟),采血量最多為400ml,平均200ml(需根據(jù)體重大小而定),其變形細(xì)胞數(shù)最高為5×1011/L以上,平均為4×1010/L。

2、器材及處理

準(zhǔn)備采血瓶(250ml玻璃瓶)注射器等用具,經(jīng)洗滌后放在重鉻酸鉀與硫酸的清潔液中浸泡過(guò)夜,然后用無(wú)內(nèi)毒素的流水沖洗3次,晾干后于260℃烤箱內(nèi)烘干3h備用。采血針、管均需用一次性無(wú)菌采血器(均無(wú)內(nèi)毒素)。

3、試劑配制

以下試劑中凡是固體試劑均需預(yù)先去除內(nèi)毒素,去內(nèi)毒素的方法要視各種試劑的耐熱度而定,一般用80~120℃不間斷烘烤約10h左右。配制試劑用的重蒸餾水應(yīng)不含內(nèi)毒素(小于0.03EU/ml內(nèi)毒素含量)。

  1. 抗凝劑1:茶-堿(theophylline)2g;磷-酸-氫-二-鈉(Na2HPO4·12H2O)2g;氯化鈉40g;無(wú)內(nèi)毒素蒸餾水1000ml。

  2. 抗凝劑2:茶-堿0.36g;磷-酸-氫-二-鈉2g;氯化鈉4g;無(wú)內(nèi)毒素蒸餾水1000ml。

(3)洗滌液:磷-酸-氫-二-鈉2g;氯化鈉40g;無(wú)內(nèi)毒素蒸餾水1000ml。

(4)裂解液:將0.05mol/L的三羥甲基氨基甲烷(Tris)用鹽酸調(diào)節(jié)至pH值為7左右,也可加入二價(jià)陽(yáng)離子如Ca2+、Mg2+、Mn2+等提高靈敏度。
二、制備步驟

1、采血 
取活鱟用水沖洗,將鱟屈曲,露出頭、胸、腹三節(jié)交界處,用碘酒擦拭后用酒精消毒。取15G針頭一次性輸血器,針尖插入盛有100ml抗凝劑1的瓶中,另一端的針頭刺入鱟的頭腹部關(guān)節(jié)處深入約1~2cm,藍(lán)色血液就流入瓶?jī)?nèi),每瓶采血100ml,注意穩(wěn)定針頭,使其不要移動(dòng)。在采血過(guò)程中,鱟血應(yīng)是順暢地流入瓶中,若發(fā)生間歇滴入就容易凝固,應(yīng)即棄去不用。采血后立即用1000r/min離心約2min。離心后,變形細(xì)胞沉積于瓶底,呈白色,此時(shí)棄去上層藍(lán)色血液即可。


2、洗滌
用抗凝劑2-20ml加入瓶中輕輕搖晃,使沉淀的變形細(xì)胞均勻地分散混懸于抗凝劑中,然后以1000r/min離心1min。棄去上清液后用4%氯化鈉磷酸鹽溶液洗滌3次,之后再次離心約1500r/min 1min,將細(xì)胞壓實(shí),棄去上清液。

3、裂解
將壓實(shí)的變形細(xì)胞加入約3倍裂解液后使細(xì)胞計(jì)數(shù)在5×1011/L,變形細(xì)胞100ml沉淀物加裂解液10ml。然后放置于4℃的冰箱內(nèi),每天震蕩2次,以使細(xì)胞裂解完-全。析出的液體應(yīng)透明無(wú)色。

4、分裝凍干
將裂解物以3000r/min離心15min,收集上清液分裝于安瓻中,放置于醫(yī)用冷凍干燥機(jī)中,-30℃快速冷凍,然后于真空狀態(tài)下升溫干燥,升溫不超過(guò)20℃。冷凍干燥后即可得到標(biāo)準(zhǔn)靈敏度的鱟試劑成品。
三、制品檢測(cè)

1、使用凝膠法進(jìn)行鱟試劑成品內(nèi)毒素測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素含量為10EU/支,準(zhǔn)確加λ無(wú)內(nèi)毒素用水(以下簡(jiǎn)稱水)1.0ml,溶解,用封口膜封住安瓿口。

2、將封口安瓿放λ旋渦混合器上旋渦混合,一般情況下國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品是20~30min,工作標(biāo)準(zhǔn)品是10~15min(其要求的理由下述會(huì)闡明)混合時(shí)注意不要使安瓿內(nèi)溶液沾上封口材料。

3、將混合好的內(nèi)毒素溶液(此時(shí)濃度為10EU/ml)用水稀釋為2λ、λ、0.5λ及0.25λ濃度的系列濃度(λ為靈敏度),即1.0、0.5、0.25、0.125EU/ml濃度的系列溶液。

4、操作方法:①取20支無(wú)內(nèi)毒素試管分為4組,每組分別標(biāo)記上E1、E0.5、E0.25、 E0.125、E0(空白管陰性對(duì)照)。②分別吸取鱟試劑0.1ml 加入E0至E1的對(duì)應(yīng)試管。③E0管加入0.1ml水,其余各管加入0. 1ml與管上標(biāo)注數(shù)字相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素。④用封口膜封閉試管,將試管內(nèi)容物輕輕搖勻。⑤把試管架放入37±2℃的恒溫水浴中保溫60±2min。在保溫過(guò)程中不能有任何震動(dòng),以免影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。保溫時(shí)間結(jié)束后將試管取出觀察結(jié)果,注意,E0管需保溫至4h才取出觀察結(jié)果。⑥實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷:將試管緩慢翻轉(zhuǎn)180°,若管內(nèi)凝膠顯示堅(jiān)實(shí)不變形為陽(yáng)性,記錄為“+";若無(wú)凝膠出現(xiàn)﹐或疑有凝膠但不能保持完整,從管壁滑脫,均判為“陰性",記錄為“-"。


會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
日本午夜羞羞在线观看| 日本大香焦免费视频| 国产精品午夜福利在线观看| 国产久久久久久久久一区二区| 91国产精品免费观看| 欧美激情a成人综合亚洲综合| 精品国产污免费网站入口| 欧美大片免费看片入口| 色狠狠av一区二区三区香蕉| 呻吟丰满一区二区三区| 精品国产日本一区二区| 色狠狠av一区二区三区香蕉| 亚洲国产成人片在线观看直播| 久久久久久国产综合精品| 欧美日韩精品免费一级| 亚洲欧美都市校园另类| 色欲香天天综合免费区一区二| 人之初av一区二区三区| 一区二区日韩av激情| 久久久久久精品无码免费看| 久久中文字幕人妻熟| 亚洲线日本一区二区三区| 波多野结衣人妻奴隶| 99久久免费精品国产免费高清| 日本精品福利在线视频| 久久婷婷综合激情亚洲狠狠| 久久国产精品久久精品国产四虎| 国产精品一区二区97| 国产精品一区二区久久| 亚洲欧美国产国产第二页| 国产69精品一区二区三区| 久久精品亚洲成在人线av| 国产农村精品一区二区| 丰满少妇爽视频一区二区三区| 国产精品一区二区久久hs| 日韩一区二区三区视频| 亚洲区一区二区三区视频| 中文字幕一区二区三区免费看| 日韩欧美亚洲中文字幕区在高我| 韩国午夜理伦三级理论电影| 日韩一区二区人妻9999|