自動化微生物生化鑒定儀培養(yǎng)基檢測
自動化微生物生化鑒定儀
HiBio-IDTM Reader (產(chǎn)品貨號: LA686)
自動化微生物生化鑒定儀培養(yǎng)基檢測
HiBio-IDTM Reader這款儀器是在KB試紙條出現(xiàn)的基礎(chǔ)上誕生的，能自動化的完成微生物的鑒定。
HiBio-IDTM Reader的輔助元件：KB紙條及試劑（微生物生化鑒定試劑盒）、電源線、電腦連接導(dǎo)線、儀器箱。另外還需要電腦以及安裝HiBio-IDTM軟件。
微生物生化鑒定的發(fā)展歷程：
適合客戶領(lǐng)域：制藥、食品、飲用水、醫(yī)院。
準(zhǔn)確率高達99%，節(jié)省時間、節(jié)省勞力和材料。
尤其適合快速篩選大量樣本以檢測某一特定病原體的質(zhì)控項目。
快速、可靠、可重復(fù)、容易操作。
通過數(shù)據(jù)庫鑒定微生物
HiMedia自動化微生物鑒定儀資料下載
HiBio-ID™微生物生化鑒定卡（貨號 KB**）
HiBio-ID™ Reader 微生物生化鑒定儀（貨號 LA686）
菌種的傳統(tǒng)鑒定方法,是通過生長過程中的生化反應(yīng)來鑒別。
HiBio-ID™微生物生化鑒定卡（貨號 KB**）， 將12種或
24種縮微的生化反應(yīng)集成在一塊鑒定卡上，將反應(yīng)后的顯色
結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對后，完成鑒定。
HiBio-ID™ Reader 微生物生化鑒定儀（貨號 LA686），
可對HiBio-ID™
生化鑒定卡更快速的讀取，一次可讀取5條。通過軟件對讀取結(jié)果計算分析，確定檢測的菌種。
HiBio-ID™ 系列產(chǎn)品 特點
1, HiBio-ID™系列產(chǎn)品，均采用以菌種擴增為基礎(chǔ)的生化檢查來鑒定微生物（鑒定到種）。
?2, HiBio-ID™
Reader可自動讀取鑒定卡的顯色結(jié)果，數(shù)據(jù)庫輔助完成鑒定。
?3, 實驗表明，準(zhǔn)確率為90%~99%。
?4, 適用于快速、大量樣本篩查微生物的部門
?5, 快速、準(zhǔn)確、可重復(fù)，
6, 省時、省力、省材料。
HiBio-ID™生化鑒定卡設(shè)計的生化反應(yīng)的原理：
堿性磷酸酶試驗：此試驗檢測微生物產(chǎn)生堿性磷酸酶的能力。堿性磷酸酶使底物釋放*，*和堿（40%NaOH）反應(yīng)產(chǎn)生明亮的粉色。
?·氨基酸脫羧試驗（賴氨酸、*、*）：該試驗采用溴甲酚紫為pH值指示劑。培養(yǎng)基中存在糖發(fā)酵時，因產(chǎn)酸使pH值降低，培養(yǎng)基變黃。酸使脫羧酶激活。激活的脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺，從而使培養(yǎng)基pH值升高，指示劑顏色從橄欖綠或亮紫色變?yōu)樽仙蛏钭仙ｊ幮苑磻?yīng)為黃色。存在賴氨酸和*脫羧時，孵育時間可能需要48小時。
?·糖代謝試驗：該試驗中酚紅為pH值指示劑。糖發(fā)酵產(chǎn)酸，pH值降低，產(chǎn)生黃色。顏色沒有變化或為粉/紅色，則為陰性反應(yīng)。一些菌在糖代謝試驗中表現(xiàn)為弱反應(yīng)，這時應(yīng)再孵育48小時，若為橙色則為陰性反應(yīng)。
?·過氧化氫酶試驗：產(chǎn)生過氧化氫酶的微生物能使過氧化氫降解為氧，表現(xiàn)為快速的氣泡產(chǎn)生。滴加1滴3％H2O2溶液即可用于檢測過氧化氫酶活性。
?·檸檬酸試驗：培養(yǎng)基包含檸檬酸鹽（惟一的碳源）、溴*藍（指示劑）和無機銨鹽。利用檸檬酸鹽作為惟一碳源的有機體，也能利用銨鹽作為惟一的氮源。銨鹽分解產(chǎn)生NH3，導(dǎo)致堿性，指示劑從綠色變成藍色。
?·七葉苷水解試驗：七葉苷可替代糖苷，可被一些菌水解產(chǎn)生葡萄糖和七葉苷原。后者和培養(yǎng)基中的鐵離子結(jié)合生成黑色復(fù)合物。
?·葡萄糖醛酸酶試驗：葡萄糖醛酸酶能裂解培養(yǎng)基中的底物X-葡萄糖苷酸。該底物被微生物攝入后，發(fā)色團和葡萄糖苷酸之間的化學(xué)鍵被細胞內(nèi)的葡萄糖醛酸酶裂解，釋放的發(fā)色團產(chǎn)生藍綠色。
?·硫化氫產(chǎn)生試驗：腸桿菌科的所有成員都能產(chǎn)生數(shù)量不等的H2S。這些微生物通過酶解方法，將硫從含硫氨基酸或無機硫化物中釋放出來。釋放的硫化氫和鐵離子或醋酸鉛反應(yīng)，產(chǎn)生硫化亞鐵或硫化鉛，形成不溶性黑色沉淀。培養(yǎng)基變黑為陽性反應(yīng)。
?·吲哚試驗：該試驗檢測細菌分解*為吲哚的能力。吲哚在培養(yǎng)基中如果存在堆積，則滴加Kovac吲哚試劑會在10秒內(nèi)產(chǎn)生玫瑰紅色，表明為陽性反應(yīng)。
?·丙二酸代謝試驗：該培養(yǎng)基用溴*藍為指示劑，丙二酸鈉為碳源，硫酸銨為氮源。丙二酸被有機體利用時，釋放出氫氧化鈉，導(dǎo)致堿性環(huán)境，使指示劑從淺綠色變?yōu)樗{色。陰性反應(yīng)則顏色不變。
?·甲基紅試驗：該試驗用甲基紅檢測有機體利用葡萄糖時產(chǎn)生的氫離子濃度（pH）。孵育結(jié)束時加入一滴甲基紅指示劑，如果顏色顯著變紅，則為陽性反應(yīng)。如果變黃或橙黃，則為陰性反應(yīng)。
?·硝酸鹽還原試驗：革蘭氏陰性桿菌還原硝酸鹽的能力各有不同。腸桿菌科細菌均能特征性還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸和N，N-二甲基-1-萘胺試劑反應(yīng)，生成粉紅色。硝酸鹽試劑紙片（DD042）也可用于該試驗。
?·ONPG試驗：乳糖發(fā)酵需要通透酶和β-半乳糖苷酶這兩種酶。非乳糖發(fā)酵菌同時缺乏這兩種酶，而有些細菌有半乳糖苷酶，但缺乏通透酶。ONPG（鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷）結(jié)構(gòu)上近似乳糖。存在Β-半乳糖苷酶時，ONPG裂解為半乳糖和鄰硝基酚（黃色化合物）。腸桿菌科成員通常根據(jù)它們發(fā)酵乳糖的能力進行分類，因而ONPG試驗在快速鑒定方面特別有用。黃色表明為陽性反應(yīng)。也可使用ONPG紙片（DD008）。在微生物生長8-24小時后放置ONPG紙片，35-37℃至少孵育1小時，出現(xiàn)黃色表明為陽性反應(yīng)。
?·氧化酶試驗：該試驗依賴于細菌內(nèi)存在催化電子供體間電子傳遞的氧化酶和一種氧還染料四甲基對苯二胺。染料被還原為深紫色。用氧化酶紙片（DD018）接觸生長菌表面或滴加Gordon-MaLeod試劑，5-10秒內(nèi)出現(xiàn)深紫色表明為陽性反應(yīng)。在10-60秒出現(xiàn)則為延遲的陽性反應(yīng)，顏色無變化為陰性反應(yīng)。
?·苯*脫氨基試驗：此實驗檢測微生物對苯*氧化脫氨的能力。該反應(yīng)產(chǎn)生苯丙酮酸，它和鐵鹽反應(yīng)產(chǎn)生綠色。滴加TDA試劑后為綠色則表明為陽性反應(yīng)。請在5分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，因為綠色很快會褪色。
?·PYR（吡咯烷酮酶）試驗：革蘭氏陽性菌如釀膿鏈球菌和多數(shù)腸球菌合成吡咯烷酮芳基酰胺酶, 能水解吡咯烷酮-β萘基酰胺，釋放出無色的吡咯烷酮和β-萘基酰胺。PYR試劑與β-萘基酰胺作用形成紅色復(fù)合物。陽性反應(yīng)即為產(chǎn)生櫻桃紅至紅色。
?·耐鹽試驗：一些微生物能耐受高濃度鹽分。生長培養(yǎng)基的氯化鈉濃度為1%時，即可用于檢測。
?·尿素酶試驗：尿素酶分解尿素為氨。反應(yīng)為陽性時，培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅指示劑顯色為粉色。
?·伏-普試驗：一些微生物通過葡萄糖代謝產(chǎn)生乙酰甲基甲醇。滴加1-2滴Barritt試劑A和1-2滴Barritt試劑B可進行檢測。2-5分鐘內(nèi)產(chǎn)生粉紅色為陽性反應(yīng)。
HiBio-ID™
生化鑒定卡 操作流程
1，準(zhǔn)備接種液
①待測菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測?？捎闷胀ㄅ囵B(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂（#M001）或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。
②挑取單個菌落，接種到5ml腦心浸出液肉湯，在35-37℃培養(yǎng)4-6小時，直到菌液濁度達到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時以上。在這種情況下，孵育應(yīng)使接種液濁度達到OD值或McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn)。
③挑取1-3個完好分離的菌落，加入到2-3ml無菌鹽水中制成均一的懸濁液作為接種液。按照產(chǎn)品說明書的要求，調(diào)整懸濁液的密度。
④遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。
注意：如果接種液濁度＜0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn)，可能會得到錯誤的假陰性結(jié)果。
2，接種
①無菌打開試劑盒，撕去密封箔。
②采用表面接種方法，在鑒定卡上每孔加50l上述接種液。每孔用接種環(huán)涂抹接種。
3，孵育
HiBio-IDTM
生化鑒定卡中，貨號為KB001--KB014的產(chǎn)品，均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時，只有KB006例外，需在室溫（22-25℃）孵育48-72小時。
4，試劑
必要時需要添加其他顯色試劑，更多細節(jié)參考結(jié)果詮釋表。
5，讀取結(jié)果
人工讀取結(jié)果：顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對，確定是否存在陽性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》完成鑒定/或用HiBio-IDTM
Readers生化鑒定儀鑒定。
