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【安捷倫】100% 水相分析有機(jī)酸，這個(gè)色譜柱有點(diǎn)兒強(qiáng)
有機(jī)酸是食品重要的組成成分之一，它與食品加工、貯存、質(zhì)量評(píng)價(jià)等密切相關(guān)，因此受到人們的重視。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB5009.157-2016 特別規(guī)定了食品中酒石酸、乳酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸和己二酸的測(cè)定方法。
極性強(qiáng)，保留弱，難測(cè)定
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上述有機(jī)酸尤其是酒石酸和蘋(píng)果酸，極性強(qiáng)，在反相色譜柱上保留弱。通常需要使用高比例水相流動(dòng)相才能獲得足夠的保留，從而達(dá)到所需的分離度。而許多反相色譜柱在使用高比例水相流動(dòng)相時(shí)保留能力會(huì)隨時(shí)間急劇下降。
這種在高含水量流動(dòng)相中分析物保留量的損失稱為“固定相塌陷”。為防止固定相塌陷，改性的極性反相色譜柱在極性化合物分析中得到了普遍應(yīng)用。
防止固定相塌陷，100% 水相分析
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Agilent Polaris HPLC 色譜柱提供了多種極性固定相填料，能夠可靠地分離極性和非極性分析物的混合物，并獲得出色的峰形。極性嵌入式 C8 和 C18 鍵合相與 100% 水相兼容，能有效保留極性化合物，如極性有機(jī)酸，且不易發(fā)生“固定相塌陷”，從而獲得可靠的分析結(jié)果。
采用 Polaris HPLC 色譜柱分析食品中的有機(jī)酸
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本應(yīng)用使用 Agilent Polaris C18-A (4.6 × 250 mm, 5 μm) 色譜柱，按照國(guó)標(biāo) GB5009.157-2016 方法對(duì)有機(jī)酸進(jìn)行了分析。
實(shí)驗(yàn)部分：
標(biāo)品及樣品溶液配制：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求配制標(biāo)準(zhǔn)品濃溶液，并用 0.1% 磷酸溶液稀釋至適宜濃度。實(shí)驗(yàn)用果汁樣品，準(zhǔn)確稱取 5g (精確至0.01g)均勻試樣，放入25mL容量瓶中，加水至刻度，混合均勻，取1mL經(jīng) 0.45μm 水相濾膜過(guò)濾，注入高效液相色譜儀分析。
儀器部分：Agilent 1260 Infinity II 高效液相色譜系統(tǒng)。液相色譜條件見(jiàn)表1。
表 1. 液相色譜條件
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
在 Agilent Polaris C18-A 色譜柱上重現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中的等度方法(流動(dòng)相為97.5% 的 0.1%磷酸水溶液/2.5% 甲醇溶液)，并對(duì)規(guī)定的有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品及一種果汁飲料樣品進(jìn)行分析檢測(cè)。如圖1所示，6 種有機(jī)酸均實(shí)現(xiàn)了充分保留和分離，在樣品中成功檢測(cè)到了檸檬酸。
圖 1. 使用 Agilent Polaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，流動(dòng)相為 97.5% 的 0.1% H3PO4 水溶液 / 2.5% 甲醇溶液。
Polaris C18-A 色譜柱具有極性嵌入式 C18 鍵合相，與 100% 水相兼容，無(wú)固定相塌陷風(fēng)險(xiǎn)。在本應(yīng)用中，調(diào)整流動(dòng)相比例至100% 的 0.1% 磷酸水溶液(100%水相)，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品及樣品進(jìn)行分析。如圖 2 所示，樣品中的有機(jī)酸能獲得更強(qiáng)的保留，使一些目標(biāo)分析物(例如蘋(píng)果酸和檸檬酸)和樣品中的干擾物實(shí)現(xiàn)了更好的分離。在 100% 水性流動(dòng)相下進(jìn)行 10 次連續(xù)進(jìn)樣，仍能獲得了良好的重現(xiàn)性，如圖 3所示。
圖 2. 使用 Agilent Polaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，流動(dòng)相為 100% 的 0.1% H3PO4 水溶液。
圖 3. 使用 AgilentPolaris C18-A 色譜柱 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 分析標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，流動(dòng)相為 97.5% 的 0.1% H3PO4 水溶液/ 2.5% 甲醇溶液。
總結(jié)：
具有極性嵌入式 C18 鍵合相的 Agilent Polaris C18-A 色譜柱能夠很好地保留和分離有機(jī)酸等極性化合物，并且在 100% 水相流動(dòng)相條件下，不會(huì)發(fā)生固定相塌陷?？梢詫?duì)國(guó)標(biāo) GB5009.157-2016 中規(guī)定的有機(jī)酸進(jìn)行分離檢測(cè)。
耗材及色譜柱推薦
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色譜柱入口: Agilent InfinityLab Quick Connect LC fitting (部件號(hào)：5067-5965)
色譜柱出口: Agilent InfinityLab Quick Turn LC fitting (部件號(hào)：5067?5966)
Agilent 樣品瓶, screw top, amber, write?on spot, certified, 2 mL (部件號(hào)：5182-0716)
Agilent 樣品瓶蓋, bonded blue, PTFE/red silicone septa (部件號(hào)：5190-702)
Agilent ValueLab PTFE-Q 針頭過(guò)濾器，13 mm 直徑，0.45 µm 孔徑 (部件號(hào)：5191-4295)
Agilent Polaris C18-A, 4.6 × 250 mm, 5 μm(部件號(hào)：A2000250X046)
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