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【中國儀器網(wǎng) 產(chǎn)品文庫】熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光壽命、熒光偏振、熒光強度、量子產(chǎn)率等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
熒光分光光度計基本結(jié)構(gòu)
1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等，故較常用。
2.檢測器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D(zhuǎn)為電信號。
3. 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。
4.發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
5.激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或*單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
熒光分析的特點：
1.高靈敏度：熒光分析的靈敏度比分光光度計法大 2 ～ 3 個數(shù)量級。 分光光度法通常在 10-7 級 ，而熒光的靈敏度達10-9。
2.強選擇性：熒光物質(zhì)具有2種特征光譜：激發(fā)光譜和吸收光譜，分光光度法通過測定物質(zhì)的吸收光譜來分析，而熒光可根據(jù)激發(fā)光譜和發(fā)射光譜來鑒定物質(zhì)。
3.信息量豐富：能提供熒光物質(zhì)的多種參數(shù)。
4.不足之處：①很多物質(zhì)本身不發(fā)熒光；②熒光的產(chǎn)生與化合物結(jié)構(gòu)的關(guān)系不明確；③干擾因素多，光分解、氧淬滅、易污染。
熒光分析的常用方法：
1.直接測定法：利用物質(zhì)本身發(fā)出的熒光來進行測定。因為大部分物質(zhì)不發(fā)熒光，該法少用。
2.間接測定法：物質(zhì)本身不發(fā)熒光，跟熒光探劑結(jié)合后轉(zhuǎn)變成熒光物質(zhì)進行測定。
3. 熒光探針探劑的條件：⑴ 探劑與被測物質(zhì)分子的某一微區(qū)必須有特異性結(jié)合且牢固；
⑵ 探劑的熒光必須對環(huán)境條件靈敏；
?、?結(jié)合的探劑不會影響被測物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)和特性；
?、?能利用熒光淬滅和光分解等對熒光進行有效定量和定性分析。
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